激光掃描共焦顯微鏡由顯微鏡光學系統(tǒng)，激光光源，掃描裝置和檢測系統(tǒng)構(gòu)成，整套儀器由計算機控制，各部件之間的操作切換都可在計算機操作平臺界面中方便靈活地進行。常用計算機為奔騰系列，內(nèi)存最好是64mb，以便于圖像的存取和運算，軟件界面多數(shù)為windows或windows nt，后者圖象采集效率更高，軟件也可在互聯(lián)網(wǎng)上方便地更新。 QEt"T7a[/
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1、顯微鏡光學系統(tǒng) '1 b8>L
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顯微鏡是lscm的主要組件，它關(guān)系到系統(tǒng)的成象質(zhì)量。通常有倒置和正置兩種形式，前者在活細胞檢測等生物醫(yī)學應(yīng)用中使用更廣泛。顯微鏡光路以無限遠光學系統(tǒng)為佳，可方便地在其中插人光學選件而不影響成象質(zhì)量和測量精度。物鏡應(yīng)選取大數(shù)值孔徑平場復(fù)消色 差物鏡為好，有利于熒光的采集和成象的清晰。物鏡組的轉(zhuǎn)換，濾色片組的選取，載物臺的移動調(diào)節(jié)，焦平面的記憶鎖定都應(yīng)由計算機自動控制。多功能顯微鏡以德國的蔡司zeiss和萊卡leica的產(chǎn)品為好，也常用日本的尼康nikon或奧林巴斯olympus產(chǎn)品。 }1 qQ7}v
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2、掃描裝置 m\jjj^f a
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lscm使用的掃描裝置有兩類，臺掃描系統(tǒng)和鏡掃描系統(tǒng)�，F(xiàn)在也有兩者結(jié)合使用的儀器。臺掃描通過步進馬達驅(qū)動載物臺，位移精度可達0.lμm，能夠有效地消除成象點橫向象差，使樣品信號強度不受探測位置的影響，可準確定位定量地掃描檢測視野中每一物點的光強度，缺點是載物臺機械移動、圖象采集速度較慢。鏡掃描有雙鏡掃描和單鏡掃描兩種，通轉(zhuǎn)鏡完成對樣品的掃描。由于轉(zhuǎn)鏡只需偏轉(zhuǎn)很小角度就能涉及很大的掃描范圍，圖象采集速度大大提高，512×512畫面每秒可達4幀以上，有利于那些壽命短的離子作熒光測定，但因光路略有偏轉(zhuǎn)會對通光效率和象差有所影響。掃描系統(tǒng)的工作程序由計算機自動控制。 U'" #jT
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3、激光光源 lJFy(^KQG,
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lscm使用的激光光源有單激光和多激光系統(tǒng)。氪氬離子激光器是可見光范圍內(nèi)使用的多光譜激光，發(fā)射波長488nm、568nm和647nm分別為藍光、綠光和紅光，大功率氬離子激光器是紫外和可見光混合激光器，發(fā)射波長為351－364nm、488nm和514nm分別為紫外光、藍光和綠光，單個激光優(yōu)點是安裝方便，光路簡單，但價格較貴并存在不同激光之間的光譜競爭和色差校正問題。多激光器系統(tǒng)在可見光范圍使用氬離子激光器，發(fā)射波長為 488nm和514nm的藍綠光，氦氖激光器發(fā)射波長為633nm的紅光，紫外光選用氬離子激光器，波長為351－364nm。其優(yōu)點是各譜線激光單獨發(fā)射，不存在譜線競爭的干擾，調(diào)節(jié)方便，但光路復(fù)雜，光學系統(tǒng)共軸準直調(diào)試要求高。1996年新型雙光子激光器問世，利用雙光子倍頻效應(yīng)，使用可見光激光來代替紫外激光作激發(fā)光源達到檢測紫外探針的目的。雙光子激光能使活體細胞熒光損傷減少，成象質(zhì)量改善，增強對樣品深層的觀察能力。通過計算機控制的聲光調(diào)制器可進行各波長光譜之間高速切換以及迅速改變激光光斑、強度和照明時間。 `x
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4、檢測系統(tǒng) wMCg` rk
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lscm為多通道熒光采集系統(tǒng)，光路上要求至少有三個熒光通道和一個透射光通道，如有第四熒光通道更好，可對物體進行多譜線激光激發(fā)，樣品發(fā)射熒光的探測器為感光靈敏度高的光電倍增管pmt，配有高速12位a/d轉(zhuǎn)換器，可以做光子計數(shù)。每個pmt前設(shè)置單獨的針孔，由計算機軟件調(diào)節(jié)針孔大小，光路中設(shè)有能自動切換的濾色片組，滿足不同測量的需要。通過在線視頻打印機或數(shù)字照相機可以實時拷貝圖象和制作幻燈。
