激光掃描共焦顯微鏡由顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)，激光光源，掃描裝置和檢測系統(tǒng)構(gòu)成，整套儀器由計算機(jī)控制，各部件之間的操作切換都可在計算機(jī)操作平臺界面中方便靈活地進(jìn)行。常用計算機(jī)為奔騰系列，內(nèi)存最好是64mb，以便于圖像的存取和運(yùn)算，軟件界面多數(shù)為windows或windows nt，后者圖象采集效率更高，軟件也可在互聯(lián)網(wǎng)上方便地更新。 O{Y_j&1
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1、顯微鏡光學(xué)系統(tǒng) :JI&ngWK
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顯微鏡是lscm的主要組件，它關(guān)系到系統(tǒng)的成象質(zhì)量。通常有倒置和正置兩種形式，前者在活細(xì)胞檢測等生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中使用更廣泛。顯微鏡光路以無限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)為佳，可方便地在其中插人光學(xué)選件而不影響成象質(zhì)量和測量精度。物鏡應(yīng)選取大數(shù)值孔徑平場復(fù)消色 差物鏡為好，有利于熒光的采集和成象的清晰。物鏡組的轉(zhuǎn)換，濾色片組的選取，載物臺的移動調(diào)節(jié)，焦平面的記憶鎖定都應(yīng)由計算機(jī)自動控制。多功能顯微鏡以德國的蔡司zeiss和萊卡leica的產(chǎn)品為好，也常用日本的尼康nikon或奧林巴斯olympus產(chǎn)品。 DV6B_A{kI
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2、掃描裝置 yE3l%<;q
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lscm使用的掃描裝置有兩類，臺掃描系統(tǒng)和鏡掃描系統(tǒng)�，F(xiàn)在也有兩者結(jié)合使用的儀器。臺掃描通過步進(jìn)馬達(dá)驅(qū)動載物臺，位移精度可達(dá)0.lμm，能夠有效地消除成象點(diǎn)橫向象差，使樣品信號強(qiáng)度不受探測位置的影響，可準(zhǔn)確定位定量地掃描檢測視野中每一物點(diǎn)的光強(qiáng)度，缺點(diǎn)是載物臺機(jī)械移動、圖象采集速度較慢。鏡掃描有雙鏡掃描和單鏡掃描兩種，通轉(zhuǎn)鏡完成對樣品的掃描。由于轉(zhuǎn)鏡只需偏轉(zhuǎn)很小角度就能涉及很大的掃描范圍，圖象采集速度大大提高，512×512畫面每秒可達(dá)4幀以上，有利于那些壽命短的離子作熒光測定，但因光路略有偏轉(zhuǎn)會對通光效率和象差有所影響。掃描系統(tǒng)的工作程序由計算機(jī)自動控制。 #[<XN s!"
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3、激光光源 V\=QAN^
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lscm使用的激光光源有單激光和多激光系統(tǒng)。氪氬離子激光器是可見光范圍內(nèi)使用的多光譜激光，發(fā)射波長488nm、568nm和647nm分別為藍(lán)光、綠光和紅光，大功率氬離子激光器是紫外和可見光混合激光器，發(fā)射波長為351－364nm、488nm和514nm分別為紫外光、藍(lán)光和綠光，單個激光優(yōu)點(diǎn)是安裝方便，光路簡單，但價格較貴并存在不同激光之間的光譜競爭和色差校正問題。多激光器系統(tǒng)在可見光范圍使用氬離子激光器，發(fā)射波長為 488nm和514nm的藍(lán)綠光，氦氖激光器發(fā)射波長為633nm的紅光，紫外光選用氬離子激光器，波長為351－364nm。其優(yōu)點(diǎn)是各譜線激光單獨(dú)發(fā)射，不存在譜線競爭的干擾，調(diào)節(jié)方便，但光路復(fù)雜，光學(xué)系統(tǒng)共軸準(zhǔn)直調(diào)試要求高。1996年新型雙光子激光器問世，利用雙光子倍頻效應(yīng)，使用可見光激光來代替紫外激光作激發(fā)光源達(dá)到檢測紫外探針的目的。雙光子激光能使活體細(xì)胞熒光損傷減少，成象質(zhì)量改善，增強(qiáng)對樣品深層的觀察能力。通過計算機(jī)控制的聲光調(diào)制器可進(jìn)行各波長光譜之間高速切換以及迅速改變激光光斑、強(qiáng)度和照明時間。 Y!0ZwwW
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4、檢測系統(tǒng) aR@s.
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lscm為多通道熒光采集系統(tǒng)，光路上要求至少有三個熒光通道和一個透射光通道，如有第四熒光通道更好，可對物體進(jìn)行多譜線激光激發(fā)，樣品發(fā)射熒光的探測器為感光靈敏度高的光電倍增管pmt，配有高速12位a/d轉(zhuǎn)換器，可以做光子計數(shù)。每個pmt前設(shè)置單獨(dú)的針孔，由計算機(jī)軟件調(diào)節(jié)針孔大小，光路中設(shè)有能自動切換的濾色片組，滿足不同測量的需要。通過在線視頻打印機(jī)或數(shù)字照相機(jī)可以實(shí)時拷貝圖象和制作幻燈。
