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    [轉(zhuǎn)載]顯微攝影技術(shù) [復(fù)制鏈接]

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    離線孫凱賓
     
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    只看樓主 倒序閱讀 樓主  發(fā)表于: 2008-07-02
        顯微攝影是一項重要的顯微技術(shù),同再現(xiàn)顯微鏡中物體影象的各種方法比較,顯微攝影是最好的方法。它對以顯微鏡作為研究工具的研究人員是必備的手段,尤其在研究染色體及其分子特征時,就更加顯得必要了。現(xiàn)在數(shù)碼相機的問世,又使顯微攝影變得更為簡便,且效果好。在有關(guān)學(xué)術(shù)研究和理論探討時,一幀好的顯微照片,可以省去許多的文字描述,并且使人心悅誠服。何況在生物學(xué)領(lǐng)域中,確有不少問題的研究,必須借助顯微攝影。 a,?u 2  
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        下面,僅以植物染色體作為拍攝材料,概述顯微攝影的基本方法,數(shù)碼顯微攝影的操作流程和傳統(tǒng)的顯微攝影基本一樣,只是省去了底片和暗房技術(shù),由計算機完成。 4@Xd(F_d  
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    一、顯微攝影對制片標本的要求 x I(X+d``  
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        染色體只見于有絲分裂和減數(shù)分裂的細胞核中,根尖、莖端、幼嫩花藥和胚珠是鏡檢染色體的材料,尤以根尖和花藥更為常用。觀察染色體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和數(shù)量,常用酶解或壓片法制片。此法能保持染色體的完整,并能接近于活體狀態(tài)。一張好的顯微照片,來源于完好的染色體制片標本。適于拍照的制片標本,應(yīng)具下列條件: HP[M"u  
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        1、選用標準的載玻片和蓋玻片  光源入射光束,經(jīng)載玻片透射標本,再經(jīng)蓋玻片進入物鏡,處于光路之中的玻璃,應(yīng)是表面無傷,內(nèi)無氣泡;外無霉斑。這樣可以杜絕光線亂反射,防止阻光、降低亮度以及有損清晰度。載玻片厚度不宜超出聚光鏡的焦距,一般在2毫米以內(nèi),可將光源的光束集中于載玻片的標本上。蓋玻片的標準厚度為0.17毫米,若使用厚度大于工作距離的蓋玻片,物鏡前透鏡會觸及蓋玻片,同時不能準焦;蓋片厚,球差就大,會降低影象質(zhì)量。有效蓋片厚度,包括封固劑的厚度,即樹膠或尤派膠用量,因此,封固劑要調(diào)稀,少許滴加一薄層。 |@pn=wW  
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        2、染色體處于相宜的時期,平展逸散,完整無損  染色體的計數(shù)和組型分析,以有絲分裂的中期(或晚前期),減數(shù)分裂的終變期和粗線期為宜。這時染色體收縮變短,呈典型狀態(tài),易識別。通過前處理的精細加工,染色體相互逸散,互不接觸,并盡可能使之平展于同一水平面上,又不失細胞的完整輪廊(圖3-1)。 !<4